临床医学论文-分子在尖锐湿疣皮损中的表达.doc

上传人:两袖****拉 文档编号:15530 发布时间:2022-02-19 09:41:07 格式:DOC 页数:4 大小:12.07KB
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1、 临床论文-尖锐湿疣皮损中分子的表达【摘要】目的:研究CD1a和ECA粘附素分子在尖锐湿疣(CA)皮损中的表达及其相互关系,探讨CA皮损局部免疫微环境的变化。 方法:采用免疫组织化学方法检测CD1a和ECA粘附素在38例尖锐湿疣患者皮损和12例正常人包皮中的表达。 结果:CA皮损中CD1a和ECA粘附素分子的表达水平明显低于正常包皮,且CD1a和ECA粘附素分子的表达水平呈正相关。 结论:尖锐湿疣患者皮损中CD1a和E-cadherin分子表达降低,可能导致人乳头瘤病毒(人乳头瘤病毒)抗原提呈障碍,这可能在人乳头瘤病毒逃避免疫监视过程中起重要作用。 【关键词】尖锐湿疣;朗格汉斯细胞;CD1a分

2、子;E-cadherin尖锐湿疣(CA)是一种由人乳头瘤病毒(人乳头瘤病毒)感染引起的常见性传播疾病,其发病机制的研究已成为目前的热点。 有人认为持续的人乳头瘤病毒感染与局部免疫监视功能障碍有关。 为探讨尖锐湿疣皮损局部免疫微环境的改变与人乳头瘤病毒免疫逃逸之间的关系,我们采用免疫组织化学技术检测了38例尖锐湿疣患者皮损中朗格汉斯细胞表面标志CD1a分子和介导角质形成细胞与朗格汉斯细胞粘附的粘附素分子。 1材料和方法。1材料1.1.1临床标本38例尖锐湿疣皮损取自2005年8月至2006年12月南京医科大学第一附属医院和东南大学附属仲达医院皮肤科和性病门诊的患者,经组织病理学检查证实,符合20

3、00年卫生部防疫司制定的尖锐湿疣诊断标准。 其中男性29例,女性9例,平均年龄32岁(2145岁)。病程2周至9个月,30例初治病例,8例复发。 12例正常对照为泌尿外科包皮环切术后正常皮肤,平均年龄30岁(1850岁)。 1.1.2主要试剂为鼠抗人CD1a单克隆抗体、鼠抗人Ecadherin单克隆抗体、即用型超灵敏TMSP免疫组化试剂盒、DAB酶底物显色剂(均购自福州迈信生物科技公司)。 1.2方法1.2.1免疫组化染色取CA患者局部皮损和正常包皮组织,10%甲醛固定,石蜡包埋。 CA标本1份常规苏木精伊红染色确认,所有标本2份分别用CD1a抗体和Ecadherin抗体染色,用PBS代替一抗

4、作为阴性对照。 操作步骤为:常规脱蜡、水化、抗原修复,依次滴加过氧化物酶封闭剂、封闭血清、一抗、生物素标记的二抗和链霉素-生物素过氧化物酶溶液,DAB显色。 1.2.2根据染色结果判断标准CD1a的表达:染色切片在光镜下观察,细胞膜或胞质呈黄褐色的树突状细胞为CD1a阳性LC,从每个切片中随机选取5个LC分布最密集的区域,在光镜高倍视野下计数CD1a阳性细胞数。 五个高倍视野中CD1a阳性细胞的平均数作为LC数1 粘附素的表达:光镜下,阳性染色细胞可见于细胞膜或细胞质中,有连续的线状或点状黄色至棕色颗粒。 Ecadherin的表达强度标准参照2基于染色强度和分布范围的半定量评分法:即染色强度(

5、A)3 tan;棕黄色;1淡黄色,分布范围(B)3,66%以上的表皮细胞被染色;2 . 33% 66%的表皮细胞被染色;1、小于33%的表皮细胞染色和两项得分的乘积(AB)。 光镜下随机观察5个高倍视野,根据染色强度和分布情况进行半定量评分,取平均值。 1.3统计学方法CA和正常包皮组织中CD1a和ECA粘附素表达的差异用独立样本T检验,用线性相关分析CD1a和ECA粘附素分子的表达关系。 2.1 CA皮损和正常皮肤CD1a和Ecadherin检测结果:在正常包皮组织中,CD1a+细胞较多地包埋在基底层和棘层细胞之间,表皮中部细胞较多。 细胞形状不规则,有的圆形、椭圆形,每个细胞周围有3 4个

6、细长突起,有的为次生突起(图1)。 12例正常包皮组织中CD1a+细胞数为(21.5910.48)个 CA皮损表皮CD1a+细胞数量较少,CD1a+细胞在中、下表皮分布较为普遍。 细胞体较小,突起明显减少、缩短甚至消失。很少见到次级突起,典型的树突状细胞也很少见,甚至只出现点状或条状突起(图2)。 CD1a+细胞在个别标本的表皮中消失。 38例CA标本中LC数为(10.6611.71),明显低于正常对照组(P 0.01)。 图1正常包皮SP400中CD1a的表达正常包皮组织的表皮Ecadherin在基底层、棘层和颗粒层下部呈强阳性染色,细胞膜呈棕色连续线状染色,胞浆内有棕色颗粒沉积(图3),其

7、表达评分为7.671.64。 与正常表皮相比,CA皮损表皮Ecadherin染色明显变浅,但部分皮损无明显染色,胞浆内棕黄色颗粒少见(图4),其表达评分为2.361.41,明显低于正常对照(P 0.01)。 1 CA皮损和正常包皮中CD1a和ECA粘附素的表达(略)2.2 CA皮损和正常包皮中CD1a和ECA粘附素表达的相关性ECA粘附素低表达的CA组织中CD1a+细胞数量较少,而ECA粘附素高表达的正常皮肤组织中CD1a+细胞数量较多。 正常皮肤和皮损表皮中CD1a+细胞数与上皮粘附素的表达强度呈正相关(r=0.627 6,P=0.01) 结论尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒感染、持续高危型病毒(H

8、PV16、18等)引起的一种新型皮肤黏膜性传播疾病。)感染与宫颈癌的发生密切相关3 由于人乳头瘤病毒感染主要局限于皮肤黏膜的表皮,很少或从不进入血液,因此局部皮肤黏膜免疫,尤其是细胞免疫,对消除持续性人乳头瘤病毒感染具有极其重要的作用。 表皮中的LC是皮肤中未成熟的树突状细胞(DC),是一种专业的抗原提呈细胞,能表达一系列分化抗原,其中CD1a、MHC类分子、HLADR、CD80、CD83、CD86、CD40等与其功能最直接相关。 CD1a是一种呈递脂质抗原的分子,是目前公认的DC的主要特征标记,已广泛用于DC的分离、纯化和体外培养鉴定4 目前,对人乳头瘤病毒感染后表皮LC数量和功能的研究主要

集中在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌5 在本研究中,CD1a单克隆抗体用于免疫组织化学染色正常皮肤和CA病变。发现CA皮损中表皮即LC的CD1a+细胞明显少于正常皮肤,树突缩短、减少甚至消失。 人乳头瘤病毒感染后,表皮LC的数量和密度明显下降,可能导致LC向辅助性T淋巴细胞呈递人乳头瘤病毒抗原的能力下降,限制特异性免疫反应的启动,从而引起人乳头瘤病毒的持续感染,造成CA持续病变或治疗后易复发。 Ecadherin是一种钙依赖性细胞间粘附分子,具有细胞粘附和维持细胞形态功能的作用,是肿瘤侵袭和转移的抑制剂。一旦粘附素丢失,细胞将变得松散并易于浸润6 表皮中的Ecadherin分子表达在基底层和基底层上的

KC和未成熟LC表面,并介导KC与KC和LC之间的粘附,这对于LC在表皮基底层的定位和保留非常重要7 宫颈鳞状细胞癌和鳞状上皮内病变中CD1a+的LC密度和Ecadherin的表达降低。进一步的体外研究表明,DC和LC与Ecadherin和人乳头瘤病毒转化的KC没有明显的粘附,但转染Ecadherin cDNA后粘附显著增强。由粘附素介导的KC和LC之间的粘附对于慢性人乳头瘤病毒感染中特异性免疫应答的激活和维持具有重要意义2 本研究证实CA表皮Ecadherin的表达显著降低,同时伴有表皮LC密度的降低,两者呈正相关。 因此,CA表皮LC减少可能与局部Ecadherin表达减少有关,使LC难以

停留在表皮7 参考文献 1,胡,等.口腔鳞状细胞癌中树突状细胞的免疫组化分析J.华西口腔医学杂志,2004,22 (2): 103105。2 Hubert P,Caberg J H,Gilles C,等.树突状细胞和朗格汉斯细胞与角质形成细胞的粘附缺陷在宫颈人乳头瘤病毒相关(前)肿瘤病变中的作用J.病理学杂志,2005年,第206卷第3期:346355页。3桑克莱门特,吉尔克.人乳头瘤病毒的分子生物学和发病机制J.欧洲皮肤性病学杂志,2002,16(3):231240。4傅士奇,达席尔瓦,KAST . M .树突状细胞和朗格汉斯细胞对人乳头瘤病毒样颗粒的差异摄取和交叉表达J.癌症研究,2003年,63: 。5GIANNINI S L,HUBERT P,DOYEN J,等.粘膜上皮微环境对朗格汉斯细胞的影响:对宫颈鳞状上皮内病变发展的影响J.国际癌症杂志,2002年,97: 654659。6PERL A K,WILGENBUS P,DAHL U,等. Ecadherin在腺瘤向癌转变中的因果作用J.自然,1998,392 (6672) :190193。7MATTHEWS K,LEONG C M,BAXTER L,等.人乳头瘤病毒16型感染皮肤中朗格汉斯细胞减少与E6介导的粘附素下调有关J.病毒学杂志,2003,77:

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